ABI 7500熒光定量PCR儀(Real-timeQuantitativePolymeraseChainReaction)和普通PCR(PolymeraseChainReaction)是兩種常用的分子生物學(xué)技術(shù),用于檢測(cè)和定量DNA或RNA。盡管它們都基于PCR原理,但在操作方式、檢測(cè)方法和結(jié)果分析上存在一些顯著的區(qū)別。
首先,實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀可以提供實(shí)時(shí)的熒光信號(hào)檢測(cè)。它使用一種特殊的熒光探針,在PCR反應(yīng)過(guò)程中實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)產(chǎn)物的積累量。這種熒光信號(hào)與模板DNA的起始濃度成正比,因此可以定量測(cè)量目標(biāo)序列的豐度。相比之下,普通PCR需要在反應(yīng)結(jié)束后進(jìn)行后續(xù)的凝膠電泳或其他檢測(cè)方法,無(wú)法提供實(shí)時(shí)的定量結(jié)果。
其次,ABI 7500熒光定量PCR儀具有更高的靈敏度和準(zhǔn)確性。由于實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào),可以在指數(shù)增長(zhǎng)階段的早期檢測(cè)到產(chǎn)物的存在,從而提高了檢測(cè)的靈敏度。另外,實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀可以通過(guò)構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái)定量測(cè)量樣品中目標(biāo)序列的拷貝數(shù),而普通PCR只能通過(guò)比較帶有已知拷貝數(shù)的外部標(biāo)準(zhǔn)樣品來(lái)估算目標(biāo)序列的拷貝數(shù)。
第三,實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀可以進(jìn)行多重檢測(cè)。通過(guò)使用不同的熒光探針或熒光染料,可以同時(shí)檢測(cè)多個(gè)目標(biāo)序列。這種多重檢測(cè)可以在同一反應(yīng)管中進(jìn)行,節(jié)省時(shí)間和樣品量。而普通PCR一般只能檢測(cè)單個(gè)目標(biāo)序列。
此外,實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀還具有更廣泛的應(yīng)用領(lǐng)域。由于其高靈敏度和準(zhǔn)確性,它被廣泛應(yīng)用于基因表達(dá)分析、病原體檢測(cè)、基因突變鑒定等領(lǐng)域。普通PCR雖然在基礎(chǔ)研究和一些簡(jiǎn)單的檢測(cè)中仍然有用,但在需要定量測(cè)量和高通量分析的場(chǎng)景下,實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀更為常用。
綜上所述,ABI 7500熒光定量PCR儀和普通PCR在操作方式、檢測(cè)方法和結(jié)果分析上存在顯著的區(qū)別。實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀具有實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)、高靈敏度、多重檢測(cè)和廣泛應(yīng)用等優(yōu)勢(shì),逐漸成為分子生物學(xué)研究和臨床診斷中的重要工具。