一、BD流式細(xì)胞儀的檢測范圍
1.流式細(xì)胞儀可以檢測細(xì)胞結(jié)構(gòu),包括:細(xì)胞大小、細(xì)胞粒度、細(xì)胞表面面積、核漿比例、DNA含量與細(xì)胞周期、R NA 含量、蛋白質(zhì)含量。
2.流式細(xì)胞儀可以檢測細(xì)胞功能,包括:細(xì)胞表面/ 胞漿/ 核的特異性抗原、細(xì)胞活性、細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子、酶活性、激素結(jié)合位點(diǎn)和細(xì)胞受體。
二、BD流式細(xì)胞儀的臨床應(yīng)用
1.流式細(xì)胞術(shù)在腫瘤學(xué)中的應(yīng)用:流式細(xì)胞術(shù)可以檢測腫瘤細(xì)胞增殖周期、檢測腫瘤細(xì)胞表面標(biāo)記、癌基因表達(dá)產(chǎn)物、進(jìn)行多藥耐藥性分析、檢測凋亡;2.流式細(xì)胞術(shù)在血液學(xué)中的應(yīng)用:檢測白血病和淋巴瘤細(xì)胞、活化血小板、造血干細(xì)胞(CD34+)計數(shù)、白血病與淋巴瘤的免疫分型、網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)、細(xì)胞移植的交叉配型和免疫狀態(tài)監(jiān)測;3.流式細(xì)胞術(shù)在免疫學(xué)中的應(yīng)用:可以進(jìn)行淋巴細(xì)胞及其亞群分析、淋巴細(xì)胞免疫分型、檢測細(xì)胞因子。
三、BD流式細(xì)胞儀的科研應(yīng)用
主要有細(xì)胞動力學(xué)功能研究、環(huán)境微生物分析、流式細(xì)胞術(shù)與分子生物學(xué)研究。
四、流式細(xì)胞術(shù)常規(guī)檢測時的樣品制備
(一) 直接免疫熒光標(biāo)記法
取一定量細(xì)胞(約1 × 106 細(xì)胞/ml ),直接加入連接有熒光素的抗體進(jìn)行免疫標(biāo)記反應(yīng)(如做雙標(biāo)或多標(biāo)染色,可把幾種標(biāo)記有不同熒光素的抗體同時加入),孵育20-60分鐘后,用PBS(pH7.2 - 7.4)洗1-2 次,加入緩沖液重懸,上機(jī)檢測。本方法操作簡便,結(jié)果準(zhǔn)確,易于分析,適用于同一細(xì)胞群多參數(shù)同時測定。雖然直標(biāo)抗體試劑成本較高,但減少了間接標(biāo)記法中較強(qiáng)的非特異熒光的干擾,因此更適用于臨床標(biāo)本的檢測。
(二) 間接免疫熒光標(biāo)記法
取一定量的細(xì)胞懸液(約1X106 細(xì)胞/ml ),先加入特異的*抗體,待反應(yīng)*后洗去未結(jié)合抗體,再加入熒光標(biāo)記的第二抗體,生成抗原-抗體-抗抗體復(fù)合物,以FCM檢測其上標(biāo)記的熒光素被激發(fā)后發(fā)出的熒光。本方法費(fèi)用較低,二抗應(yīng)用廣泛,多用于科研標(biāo)本的檢測。但由于二抗一般為多克隆抗體,特異性較差,非特異性熒光背景較強(qiáng),易影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。所以標(biāo)本制備時應(yīng)加入陰性或陽性對照。
另外,由于間標(biāo)法步驟較多,增加了細(xì)胞的丟失,不適用測定細(xì)胞數(shù)較少的標(biāo)本。